Northern blot en neumonía por Klebsiella pneumoniae

Para usar la técnica de hibridación northern en Klebsiella pneumoniae, se realizaron los siguientes pasos:

1. Se realizó el aislamiento de ARN, por medio de líquido bacteriano de cultivos usando el kit RNeasy.
2. Después se usó 2 ug de ARN en gel de agarosa al 1% con formaldehído al 1,2% durante una hora.
3. Posteriormente pasó por la membrana de nylon Porablot con sondas de hibridación que detectaron los genes ramA, acrB y rrsE, los cuales fueron cortados por la enzima EcoRI.
4.  Se etiquetaron los genes usando el sistema Megaprime DNA.

Las membranas de nylon fueron pre-hibridadas a 65 ℃ en un tubo con 10 ml de Speed-HybII al 7%, durante 1 hora, se usaron sondas específicas para los genes. Posteriormente se lavaron las membranas de nylon tres veces a 65 ℃ durante 15 minutos y finalmente expuestas a autorradiografía Kodak MS.

Links de referencia:
- http://www.newmicrobiologica.org/PUB/allegati_pdf/2017/2/135.pdf

- https://www.researchgate.net/publication/271593340_Elucidation_of_the_RamA_Regulon_in_Klebsiella_pneumoniae_Reveals_a_Role_in_LPS_Regulation

- https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3136514/

Fig. 1. Pasos de la técnica Northern blot.

 
Fig. 2. Resumen de los pasos de la técnica Northern blot.

Fig. 3. Resultados del Northern blot en Klebsiella pneumoniae.